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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/745| CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA Y MODELACIÓN ESTRUCTURAL DE LA ENZIMA DEHIDROASCORBATO REDUCTASA (DHAR) DE MANGO (Mangifera indica L.) | |
| DEYANIRA FIMBRES GARCIA | |
| CARMEN ARMINDA CONTRERAS VERGARA MARIA AUXILIADORA ISLAS OSUNA IRASEMA DEL CARMEN VARGAS ARISPURO ROGERIO RAFAEL SOTELO MUNDO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Las plantas se encuentran expuestas de manera constante a diversos factores de estrés que las lleva a producir especies reactivas de oxígeno (ROS) adicionales a las generadas en el metabolismo celular, causándoles estrés oxidativo y daño celular. Para protegerse del daño oxidativo causado por ROS, las plantas cuentan con un sistema antioxidante, siendo el ascorbato (AsA) el principal antioxidante hidrosoluble en plantas. La cantidad de AsA es estrechamente controlada por sus rutas de síntesis y de reciclaje, donde el reciclaje tiene un importante rol en la respuesta y adaptación al estrés. En la vía de reciclaje de AsA, la enzima dehidroascorbato reductasa (DHAR), la cual es un miembro de la familia de las glutatión S-transferasas (GSTs) es clave para el mantenimiento del AsA reducido. El objetivo de este trabajo fue determinar las características bioquímicas y modelar la estructura tridimensional de la enzima DHAR de mango (MiDHAR). La proteína se sobreexpresó de forma heteróloga encontrándose en forma soluble y se purificó por cromatografía de afinidad a metales (Ni-NTA). Una vez purificada, se determinó su actividad enzimática así como su estabilidad a diferentes rangos de temperatura y pH. La proteína pura fue estable en un amplio rango de pH y temperatura conservando más del 80 y 75% de su actividad a pH 9 y 45°C, respectivamente. Por otra parte, MiDHAR mostró un comportamiento cinético de tipo Michaelis-Menten y se determinaron las constantes cinéticas para sus sustratos, obteniendo una Km y Vmax para GSH de 5.63mM y 84.3μM min-1 y para DHA 0.77mM y 74.0μM min-1 respectivamente. A partir de la secuencia aminoacídica de MiDHAR, se obtuvo un modelo estructural por homología de la enzima, utilizando la estructura cristalina recientemente reportada de DHAR de arroz (OsDHAR) (PDB: 5D9W) y se identificaron los posibles aminoácidos del sitio catalítico. Los resultados muestran que la MiDHAR es una enzima estable a valores de pH altos y es termoestable a las condiciones probadas, lo que podría brindarle resistencia en condiciones de estrés. Se sugiere un mecanismo catalítico de reducción tipo ping-pong, que sería necesario corroborar con otros estudios. | |
| 2016 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Público en general | |
| AGROQUÍMICA | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE MAESTRÍA EN CIENCIAS. |
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