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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/477| CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA Y BIOFÍSICA DE LA LISOZIMA RECOMBINANTE DE Manduca sexta | |
| ALONSO ALEXIS LOPEZ ZAVALA | |
| ROGERIO RAFAEL SOTELO MUNDO ELISA MIRIAM VALENZUELA SOTO GLORIA MARTINA YEPIZ PLASCENCIA ENRIQUE FERNANDO VELAZQUEZ CONTRERAS | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| La lisozima (E.C. 3.2.1.17) es una glicohidrolasa que rompe los enlaces β (1-4) entre el ácido Nacetil murámico y la N-acetil glucosamina del peptidoglicano que se encuentra en la pared celular de las bacterias Gram (+). La lisozima ha sido ampliamente estudiada en vertebrados e invertebrados como modelo de estudio del plegamiento y de la relación estructura-función de las proteínas. Entre los factores de defensa de los insectos se encuentran la lisozima, la cual es una proteína inducible en respuesta a un estímulo externo. La mayoría de las lisozimas de insectos tienen características moleculares y catalíticas similares a la lisozima de clara de huevo de gallina (HEWL, tipo c). Sin embargo, en los últimos años se han descubierto propiedades catalíticas novedosas en Ia lisozima de insectos que difieren de las tipo c. En un intento por elucidar la relación entre la estructura y función se han caracterizado algunas lisozimas de insectos y estudiado su relación con las tipo c. En el presente trabajo se inició la caracterización bioquímica y biofísica de la lisozima recombinante del insecto Manduca sexta (Mslis). La Mslis fue purificada mediante cromatografía de afinidad a Micrococcus luteus a partir de un extracto proveniente de sobreexpresión recombinante en Escherichia coli y plegamiento in vitro. En base a la secuencia deducida de aminoácidos y a la secuencia del N-terminal, la Mslis pertenece al tipo c. Ente las características bioquímicas de la Mslis recombinante se encontró que el pH óptimo fue 6.5, lo que concuerda con lo reportado para otras lisozimas tipo c utilizando M. luteus como sustrato. La temperatura óptima de Mslis (35°C) fue 10°C más baja que para HEWL (45°C) a pH 6.0. La actividad catalítica de la Mslis a bajas temperaturas (5-25°C) fue de 2-4 veces mayor que para HEWL. Este resultado es similar a lo reportado para la lisozima de Bombix mori, en la que se han encontrado características similares a las enzimas adaptadas al frío. Por otro lado, se determinó el contenido de estructura secundaria de Mslis mediante dicroísmo circular. El contenido de estructura secundaria de la Mslis mostró una tendencia similar a otras lisozimas, es decir, rnayor contenido de hélices-α. Sin embargo, para Mslis éste porcentaje (hélices-α = 57%) es mayor que el de cualquier otra lisozima tipo c reportada a la fecha. | |
| 2004 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Público en general | |
| QUÍMICA | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE MAESTRÍA EN CIENCIAS. |
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