Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem:
http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/466| AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE ENZIMAS PROTEASAS DE VÍSCERAS DE SARDINA MONTEREY (Sardinops sagax caerulea) | |
| FRANCISCO JAVIER CASTILLO YAÑEZ | |
| RAMON PACHECO AGUILAR ROGERIO RAFAEL SOTELO MUNDO FERNANDO LUIS GARCIA CARREÑO EDMUNDO BRITO DE LA FUENTE GERARDO ALVAREZ MANILLA DUBON | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| TECNOLOGIA DE ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL | |
| Se purificaron y caracterizaron bioquímicamente tres proteasas digestivas de las vísceras de sardina Monterey (Sardinops sagax caerulea). Se determinó la actividad proteolítica total de las vísceras, obteniéndose que la actividad proteolítica alcalina fue mayor a la actividad proteolítica ácida. De la purificación de enzimas ácidas se obtuvo una fracción que mostró una sola banda en SDS-PAGE y dos bandas en isoelectroenfoque con puntos isoeléctricos (pI's) de 4 y 4.5 respectivamente. El pH óptimo de actividad para estas enzimas fue de 2.5, presentando alta estabilidad en el rango de pH de 2 a 6 y una marcada pérdida de actividad a pH's neutro y alcalinos. La temperatura óptima de actividad fue de 45 ºC, detectándose alta actividad a 10 ºC y pérdida de actividad a 55 ºC. Estas enzimas fueron inhibidas por Pepstatin A y no por el inhibidor de tripsina de soya ni por EDTA. Las características generales de estas enzimas presentaron gran similitud con Pepsina II aislada de otras especies de peces, lo cual permitió clasificarlas como aspártico-proteasas. Se purificó y caracterizó tripsina extraída de ciegos pilóricos de sardina. El peso molecular fue de 25,000 Da, mostrando actividad específica esterasa sobre TAME 4.5 veces mayor que la actividad específica amidasa sobre BAPNA. La enzima purificada fue sensible al inhibidor de serin-proteasas fenil-metil-sulfonil-fluoruro (PMSF) e inhibida totalmente por el inhibidor de tripsina de soya (SBTI) y por benzamidina; sin embargo, no fue susceptible al inactivador de metalo-proteasas EDTA, ni al inhibidor de quimotripsina tosil-L-fenilalanina clorometil cetona (TPCK). El pH óptimo de actividad fue de 8.0, con máxima estabilidad a pH's entre 7 y 8 y una marcada pérdida de estabilidad a pH's menores a 4 y mayores a 11. Su temperatura óptima de actividad fue de 50 ºC, con estabilidad a la temperatura relativamente baja (> 50 ºC). Las constantes cinéticas Km y kcat de tripsina fueron 0.051 mM y 2.12 seg-1 respectivamente, mientras que su eficiencia catalítica (kc n 1 .IK1 1 1) fue de 41 sec-1 mM-1. También se purificó y caracterizó una quimotripsina de las vísceras de sardina. El peso molecular de la enzíma aislada fue de 26,000 Da, con actividad específica esterasa sobre BTEE 3.2 veces mayor que la actividad específica amidasa sobre SAAPNA. La enzima purificada fue sensible al inhibidor de quimotripsina (TPCK) e inhibida totalmente por los inhibidores de serin-proteasas (PMSF) y el ínhibidor de hipsina de soya (SBTI) | |
| 2003 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| Público en general | |
| QUÍMICA | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE DOCTORADO EN CIENCIAS (DC) |
Cargar archivos:
| Fichero | Descripción | Tamaño | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| Castillo-Yañez F J_DC_2003.pdf | 18.78 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |