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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/428| CARACTERIZACIÓN DE LAS FORMAS NATIVA Y MUTANTES DE LA GLUTATIÓN STRANSFERASA CLASE Mu DE CAMARÓN BLANCO Litopenaeus vannamei | |
| CARMEN ARMINDA CONTRERAS VERGARA | |
| GLORIA MARTINA YEPIZ PLASCENCIA ROGERIO RAFAEL SOTELO MUNDO ELISA MIRIAM VALENZUELA SOTO FERNANDO LUIS GARCIA CARREÑO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| TECNOLOGIA DE ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL | |
| Las glutatión S--transferasas (GST's) son una familia de enzimas detoxificantes que catalizan la conjugación del glutatión con una gran variedad de compuestos electrofílicos. Existen varios tipos de GSTs, que se diferencian por su especificidad hacia el substrato electrofílico y aunque todas comparten características estructurales generales, las diferencias en las secuencias primarias y por ende, en las estructuras de las enzimas, afectan sus propiedades catalíticas, Los aminoácidos Y6 y Y115 (en la mayoría de las GST clase mu) se han estudiado como los principalmente involucrados en las interacciones entre la enzima y el sustrato durante la catálisis de las GSTs, debido a la participación de su grupo hidroxilo en la activación y estabilización del glutatión (GSH), así como brindando asistencia electrofílica en la catálisis. Para estudiar la importancia de estos residuos fue el sitio activo de la GST clase mu del camarón Litopenaeus vannamei, los residuos de tirosina Y7 y Y116 fueron reemplazados por fenilalanina por medio de mutagénesis sitio-dirigida. Las proteínas recombinantes de ambas mutantes (Y7F y Y116) así como la enzima silvestre se obtuvieron por sobreexpresión heteróloga en Escherichia coli y se purificaron por cromatografía de afinidad hacia GSH. De la misma manera se purificó una GST nativa clase mu a partir de branquias de camarón L. vannamei. Se determinaron las constantes cinéticas de las enzimas utilizando CDNB como segundo substrato y se obtuvieron modelos estructurales de la enzima silvestre y las mutantes. Los valores de velocidad de catálisis (kcat) para la enzima silvestre recombinante resultaron muy similares a las reportadas para la GST clase mu purificada a partir de branquias. Sin embargo la eficiencia catalítica (Kcat/KmGSH) resultó mayor para la enzima recombinante, esto debido a la mayor afinidad (Km ) que presentó esta enzima por el sustrato GSH. En las mutantes la eliminación del grupo hidroxilo resultó en un ligero aumento en la Kcat de la Y116F y tuvo muy poco efecto en kcat-Km para GSH y CDNB, esto debido a la menor afinidad de la Y116. rec()mbinanles, no se ()bservaron cambios importantes en la topologla del sitio activo al comparar las mutantes con la enzima silvestre. En 9eneral, el cambio en los residuos Y7 y Y116 no so reflejó en los valores para las constantes cinéticas, lo cual podrla Indicar que la función que desemperian estos rnslduos en la catálisis, no es tan relevante para la GST de camarón. | |
| 2007 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| Público en general | |
| BIOLOGÍA Y QUÍMICA | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE DOCTORADO EN CIENCIAS (DC) |
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