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TRANSFORMACIÓN GÉNICA DE MUTANTES clv2 DE Arabidopsis thaliana CON EL GEN ORTÓLOGO CLV2 DE MANGO
LUCIA TERESA ANGULO SANCHEZ
MARIA AUXILIADORA ISLAS OSUNA
Acceso Abierto
Atribución-NoComercial-SinDerivadas
Agricultura protegida
Los frutos se desarrollan a partir de los meristemos apicales de los órganos florales los cuales albergan células pluripotentes poco diferenciadas. El tamaño y la actividad de los meristemos es clave para el desarrollo de las diferentes estructuras u órganos de la planta. La ruta de señalización de la familia CLAVATA (CLV) está formada por tres componentes proteicos: CLV1, CLV2 y CLV3, los cuáles regulan negativamente la proliferación celular en los meristemos. El gen CLAVATA2 (CLV2) codifica para un receptor rico en leucinas y su importancia en la diferenciación celular durante la formación de flores y frutos se ha investigado en Arabidopsis thaliana. La región codificante de CLV2 de mango se obtuvo, su tamaño es de 2175 pares de bases y codifica para una proteína de 724 aminoácidos, que es 65% idéntica y 77% similar a CLV2 de A. thaliana. El objetivo de este estudio fue clonar CLV2 de mango y obtener vectores binarios para realizar la complementación génica de mutantes clv2 de A. thaliana. El cDNA CLV2 de mango se clonó en pGEM y pCR8/topo/GWR, posteriormente se subclonó en pBIB:KAN:GWR:GFP. El vector pBIB:KAN:MiCLV2::GWR:GFP se recombinó para incorporarle el promotor nativo de CLV2 de A. thaliana. También se recombinó MiCLV2 en el vecto pBIB:BASTA:35S:GWR y se obtuvo pBIB:BASTA:35S::MiCLV2::GWR. Posteriormente, los dos vectores binarios fueron transformados en Agrobacterium tumefaciens GV3103, el cual se utilizó para infectar Arabidopsis mutantes clv2 para transformarlas con el gen ortólogo de mango. Se seleccionaron germinados de A. thaliana resistentes a kanamicina, y se detectó la proteína verde fluorescente en los cotiledones y en la raíz por microscopía confocal lo que confirma que se transformaron las plantas de Arabidopsis. Se continuará para obtener plantas transformadas adultas y semillas de la siguiente generación. Por otra parte, se seleccionó una planta resistente al herbicida glufosinato (BASTA) de la cuál se obtuvieron semillas para sembrarlas y obtener plantas de la siguiente generación. En ambas plantas F1 se evaluará la complementación genética y el fenotipo resultante.
Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C.
31-01-2016
Tesis de maestría
Español
Nacional
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Público en general
CIENCIAS AGRARIAS
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