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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/1662| ANÁLISIS DE PROTEÍNAS DE SEÑALIZACIÓN DE LA VÍA TLR2 EN CÉLULAS DENDRÍTICAS DERIVADAS DE MONOCITOS DE CERDO ESTIMULADAS CON Bifidobacterium animalis ssp. lactis Bb12 | |
| VALERIA BARCENAS PRECIADO | |
| VERONICA MATA HARO - | |
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| INMUNOLOGIA - RNCTIMX - INMUNOLOGIA | |
| Los probióticos son microorganismos benéficos para la salud del huésped. Estos pueden ser reconocidos por células dendríticas (DCs) a través de receptores de membrana, activando vías de señalización intracelulares. El probiótico Bifidobacterium animalis ssp. lactis Bb12 es capaz de estimular a DCs a través de la vía de señalización de TLR2, activando proteínas involucradas en la cascada de señalización y finalmente a factores de transcripción para producir citocinas. El objetivo del estudio es analizar la expresión de las proteínas TRAF6, ERK1/2 y SOCS1 en DCs porcinas estimuladas con Bb12. Primero se estableció un cultivo de monocitos que fue suplementado con IL-4 y GM-CSF para derivar a DCs. Su fenotipo se comprobó mediante tinción con los anticuerpos anti-CD1, anti-MHC II y anti-CD14 y se analizó por citometría de flujo. Para la determinación de proteínas de señalización, se estableció un inóculo de Bb12 y las moDCs se estimularon durante 0, 0.5, 1, 2 y 24 horas, adicionalmente, se bloqueó al receptor TLR2 previo a la estimulación con el probiótico. Posteriormente se extrajeron las proteínas celulares con buffer de lisis RIPA enriquecido con una mezcla de inhibidores de proteasas, seguido de electroforesis SDS-PAGE, e inmunodetección en una membrana de PVDF de las proteínas ERK1/2 y pERK 1/2, TRAF6, SOCS1 y β-actina. Por último, se cuantificó la producción de las citocinas IL-10 e IL-12 en moDCs estimuladas con el probiótico durante 24 h mediante el método de ELISA. En los resultados de citometría de flujo, se obtuvo una población celular que expresó un 73% de los marcadores de superficie anti-CD1 y anti-MHC II en células inmaduras, dichos marcadores aumentaron a un 90% en células estimuladas con LPS. El análisis de inmunodetección mostró que Bb12 induce la expresión constante de TRAF6 aun cuando se bloquea al receptor TLR2. A diferencia de ERK, este aumenta su expresión a partir de las 2 h de estímulo y disminuye cuando se bloquea TLR2. SOCS 1 se mantiene constante y también disminuye a partir de las 2 h al bloquear el receptor. Bb12 induce principalmente a IL-10 y también se produce aun cuando se bloquea TLR2, sin cambios en IL-12 en ninguno de los tratamientos. Estos resultados muestran que el probiótico Bb12 modula la expresión de proteínas de señalización a través de la vía de TLR2. A su vez, se sugiere la activación de vías alternas. - Otro | |
| VALERIA BARCENAS PRECIADO | |
| 2020 | |
| OTRAS - 2974 - 319999 | |
| Otros - OTROS | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE MAESTRÍA EN CIENCIAS. |
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