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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/1408| MONITOREO DE Erwinia amylovora EN FUENTES DE INÓCULO PRIMARIO: OPTIMIZACIÓN DE PROTOCOLOS PARA LA DETECCIÓN DE FORMAS NO CULTIVABLES MEDIANTE UNA PCR DE VIABILIDAD SEMICUANTITATIVA | |
| DANIEL ALEJANDRO DE LA PEÑA BACA | |
| CARLOS HORACIO ACOSTA MUÑIZ - | |
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| Agricultura - RNCTIMX - Agricultura | |
| En los agroecosistemas, la inanición y la exposición de algunas especies bacterianas a compuestos citotóxicos inducen la formación de formas no cultivables como se ha documentado en Erwinia amylovora, agente causal del tizón de fuego. Esta situación dificulta el monitoreo y control del patógeno. Para superar esta limitación, se han desarrollado técnicas como la PCR de viabilidad (v-PCR), que permite detectar y cuantificar estas formas en matrices complejas. Sin embargo, aún no existe una técnica estandarizada, por lo que es necesario realizar modificaciones o adaptaciones que permitan determinar de forma directa, las poblaciones viables de E. amylovora, tanto en sus formas cultivables como no cultivables, a partir de muestras ambientales. Para ello, se colectaron doscientas muestras que incluían cancros remanentes activos, brotes jóvenes sintomáticos, frutos necrosados, tejido asintomático, tejido en fase de transición, suelo asociado a las raíces, flores de manzano, malezas no hospederas, abejas melíferas y agua de riego. Las muestras fueron procesadas de manera secuencial, comenzando con un pre-tratamiento (para liberar las células bacterianas contenidas en la muestra), seguido del conteo de células cultivables en medios selectivos, un tratamiento con DNasa y EMA (para discriminar el material genético libre o de células necrosadas), el aislamiento de ADNg y por último, la detección y cuantificación mediante v-sqPCR (correlacionando la concentración de dsDNA de los productos amplificados con la concentración celular conocida en muestras control). El 43.5 % de las muestras resultaron positivas en medio selectivo (con variaciones entre el 10 y el 90 % en el índice de positividad, según el tipo de muestra), siendo las muestras de tejido sintomático las que albergaron las poblaciones más abundantes de células cultivables (entre 10⁵ y 10⁷ UFC/g). Por otro lado, solo el 13 % de las muestras resultaron positivas mediante v-sqPCR (con un índice de positividad entre el 5 y el 75 %). Lo anterior, debido a un umbral mínimo de detección subjetivamente alto (≈1 × 10⁴ UFC). A pesar de ello, muestras específicas de cancros, brotes marchitos y frutos momificados mostraron conteos celulares significativamente mayores al ser analizadas con v-sqPCR, frente a lo registrado en placa de cultivo. Esto confirma la presencia de formas no cultivables de E. amylovora y su abundancia fluctúa entre 10⁴ y 10⁷ células/g. - Otro | |
| Daniel Alejandro de la Peña Baca | |
| 2025 | |
| CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA - 6 - 6 | |
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| Aparece en las colecciones: | TESIS DE DOCTORADO EN CIENCIAS (DC) |
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