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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/1396| PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE UNA PROTEASA TERMOESTABLE CON POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO DE Solanum elaeagnifolium | |
| JOSE GUADALUPE TEUTLE PAREDES | |
| MIGUEL ANGEL MAZORRA MANZANO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Las enzimas proteolíticas representan alrededor del 60 % del mercado total de enzimas que actualmente se comercializan como agentes catalíticos para aplicaciones biotecnológicas. Se ha reportado que las bayas de Trompillo (Solanum elaeagnifolium) posen enzimas proteolíticas con actividad a altas temperaturas y con potencial para ser utilizadas en el proceso de elaboración de quesos. Sin embargo, se desconocen sus propiedades bioquímicas, de especificidad y estabilidad. Por lo anterior, el objetivo del presente trabajo fue purificar y caracterizar bioquímicamente una proteasa termoestable de S. elaeagnifolium, así como explorar las propiedades de termoestabilidad de la actividad proteolítica y coagulante de la leche (ACL) en el extracto crudo (EC) de S. elaeagnifolium. El EC presentó máxima actividad a pH 10.0 y temperatura de 80 °C. Además, la ACL del EC incrementó en el rango de temperatura de 30 a 85 °C, sin pérdida de actividad a los 85 °C. La actividad proteolítica del EC presentó estabilidad en el rango de pH de 5.0 a 12.0 y, temperaturas menores a 75 °C, reteniendo más del 50 % de actividad después de 5 h de tratamiento térmico a 50, 60 y 65 °C. La actividad proteolítica del EC fue fuertemente inhibida por PMSF, sugiriendo la presencia de proteasas tipo serina. El protocolo de purificación desarrollado permitió concentrar 8.8 veces la enzima proteolítica, con 4.2 % de rendimiento. La proteasa parcialmente purificada de trompillo con masa molecular aparente de 70 kDa fue fuertemente inhibida por PMSF, indicando que corresponde a una serina proteasa (Sela SP1). Sela SP1 mostró actividad proteolítica en un rango amplio de pH y temperatura, con máxima actividad a pH 11.0 y temperatura de 80 °C. El análisis por calorimetría diferencial de barrido (DSC) señaló que Sela SP1 tiene una temperatura media de transición Tm alrededor de 87 °C. Por otro lado, los parámetros cinéticos Km y V max, utilizando azocaseína como sustrato, fueron 77.8 μM y 2.4 μM/s, respectivamente. El perfil de degradación de sustratos naturales reveló que Sela SP1 posee alta capacidad hidrolítica sobre α-lactoalbúmina, β-lactoglobulina así como α-, β- y κ-caseína. El análisis por espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) indicó que Sela SP1 es estructuralmente semejante a proteasas tipo-subtilisina STB de Solanum pennellii. Por lo anterior, se concluye que la serina proteasa Sela SP1 (tipo subtilisina) de S. elaeagnifolium, reportada por primera vez, posee propiedades de estabilidad | |
| 27-10-2021 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| BIOLOGÍA Y QUÍMICA | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE MAESTRÍA EN CIENCIAS. |
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