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ALTERACIONES EN LA EXPRESIÓN DE GENES QUE CODIFICAN ADN DEMETILASAS DE VID (Vitis vinifera L.) EN RESPUESTA A LA CRIOCONSERVACIÓN | |
JUAN LUIS GARCIA VAZQUEZ | |
MARISELA RIVERA DOMINGUEZ | |
Acceso Abierto | |
Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
La vid (Vitis vinifera L.) es un cultivo expuesto a estres biótico y abiótico, estas condiciones pueden causar alteraciones fenotípicas debido a los cambios genéticos y epigenéticos como metilación y desmetilación del ADN. Con el objetivo de conocer los posibles efectos de la crioconservación de vid en la actividad de las enzimas demetilasas de ADN, en este trabajo se plantea analizar la expresión de genes involucrados en la desmetilación de ADN de vid (Vitis vinifera) cv Redglobe post-crioconservación meidante vitrificación. Se obtuvo la caracterización de las ADN demetilasas mediante un análisis profundo in silico utilizando Arabidopsis thaliana como referencia, realizando un análisis filogenético, búsqueda de secuencias promotoras, dominios y motivos, y la cuantificación de expresión relativa mediante qRT-PCR usando el método de ΔΔCt. Se encontraron tres secuencias genéticas: VIT_13s0074g00450 (DEMETER, DMT), VIT_08s0007g03920 (Represor del Silenciamiento 1, ROS1), y VIT_06s0061g01270 (DEMETER LIKE 3, DML3). En el análisis filogenético se encontró que las secuencias de V. vinifera y A. thaliana tenían la misma ascendencia común. Se estudiaron los promotores de los genes de ADN demetilasas, encontrando elementos de respuesta como AP-2, Myb, bZIP, TBP, y GATA, además se encontraron dominios conservados exclusivos de ADN demetilasas como RRM DME (Motivo de reconocimiento de ARN-DME) y Perm CXXC (Unidad zf-CXXC unica permutada). En la búsqueda de secuencias motivo se encontró que estas están relacionadas con la unión al ADN, la regulación de la expresión génica asociada a procesos de respuesta al estrés abiótico y la regulación del crecimiento celular. Para cada gen de ADN demetilasa (DMT, ROS1 y DML3) se obtuvieron varios conjuntos de cebadores utilizando el programa QuantPrime. Los cebadores fueron validados utilizando ADN genómico y ADNc de tejidos de V. vinifera. De acuerdo con los datos encontrados en este estudio se concluyó la caracterización de los genes ADN demetilasa de V. vinifera L. (DMT: VIT_13s0074g00450, ROS1:VIT_08s0007g03920, y DML3:VIT_06s0061g01270) y mediante el análisis de expresión relativa se observó que el tratamiento de vitrificación no altera significativamente la expresión de genes de ADN demetilasas, en cambio, se observó que la crioconservación altera la expresión de los genes que codifican para ADN demetilasas (DMT, ROS1 y DML3). | |
28-01-2022 | |
Tesis de maestría | |
Español | |
CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA | |
Aparece en las colecciones: | TESIS DE MAESTRÍA EN CIENCIAS. |
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