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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/1186| REGULACIÓN DE LA AFINIDAD Y EFICIENCIA CATALÍTICA DE LA BETAÍNA ALDEHÍDO DESHIDROGENASA DEL CAMARÓN Litopenaeus vannamei, POR LA SALINIDAD | |
| MARIA FERNANDA DELGADO GAYTAN | |
| Elisa Miriam Valenzuela Soto | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| El camarón blanco Litopenaeus vannamei durante su ontogenia vive en ambientes acuáticos con diferentes salinidades, por lo que este organismo está expuesto constantemente a condiciones de estrés osmótico. En animales marinos, la síntesis del osmolito glicina betaína es una de las principales estrategias usadas para proteger a la célula del estrés osmótico. Glicina betaína es sintetizada por la enzima betaína aldehído deshidrogenasa (BADH) en animales marinos. A pesar de que la BADH es la enzima responsable de la síntesis de glicina betaína, en organismos marinos se conoce muy poco sobre los mecanismos de regulación de esta enzima. Debido a lo anterior, el objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la salinidad en la afinidad y eficiencia catalítica de la BADH del camarón blanco L. vannamei. Mediante análisis in silico de la proteína BADH del camarón, se encontró que la enzima presenta una alta identidad y dominios conservados con las BADHs de organismos marinos. La BADH del L. vannamei se clasifica filogenéticamente en la familia ALDH9. Además, en el modelo de la BADH se identificaron tres cavidades de unión a potasio, lo que sugiere que la actividad de la enzima puede ser regulada por la presencia de este catión. Por otra parte, se cuantificó la actividad de la BADH y el contenido de glicina betaína en los tejidos de camarones expuestos a diferentes tratamientos de salinidad. Se demostró que en L. vannamei la actividad de la BADH es regulada de manera tejido específico por la salinidad. La actividad de la BADH y el contenido de glicina betaína aumentan a medida que se incrementa la salinidad del ambiente, lo que indica que en el camarón la enzima participa en los procesos de ajuste osmótico en medios hipertónicos. Finalmente, se estableció un esquema de sobreexpresión y purificación para la BADH. La sobreexpresión se llevó a cabo en Escherichia coli BL21 (DE3) transformadas con el plásmido recombinante pET-15b-LvBADH. Los niveles más altos de la BADH se detectaron cuando la inducción se realizó con 0.5 mM de IPTG durante 4 horas a 37 ° C, pero se detectó la proteína de forma insoluble. La BADH se solubilizó con cloruro de guanidinio y se purificó mediante cromatografía de afinidad por metales inmovilizados. El método de purificación tiene un alto rendimiento, sin embargo, aún es necesario establecer las condiciones de replegamiento para poder realizar estudios bioquímicos y cinéticos de la enzima. Palabras clave: Betaína aldehído deshidrogenasa | |
| 19-08-2019 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| BIOLOGÍA MOLECULAR | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE DOCTORADO EN CIENCIAS (DC) |
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