Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem:
http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/1171| ESTUDIOS BIOQUÍMICOS Y ESTRUCTURALES DE ENZIMAS CLAVE EN EL DESARROLLO Y METABOLISMO ANTIOXIDANTE DE Vibrio parahaemolyticus: GLUTAMATO RACEMASA Y GLUTARREDOXINA 2 | |
| Leonardo Yame Fox Uribe | |
| ROGERIO RAFAEL SOTELO MUNDO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Vibrio parahaemolyticus se ha relacionado al síndrome de mortalidad temprana (SMT) del camarón blanco (Litopenaeus vannamei), generando un problema de salud y económico en la acuicultura a nivel global. Es por ello que se buscan alternativas para contrarrestar su crecimiento e infección a través de la investigación de enzimas y sustratos clave en el desarrollo de este patógeno. En el presente trabajo, se caracterizaron dos proteínas, la glutamato racemasa (VpGluR) y la glutarredoxina 2 (VpGrx2) así como el sustrato de VpGluR, el glutamato (D-Glu), mismos que son claves en el desarrollo de la bacteria. La VpGluR se sobreexpresó de manera insoluble en cuerpos de inclusión los cuales se solubilizaron y replegaron de manera in vitro y se purificó por cromatografía de afinidad y exclusión molecular. Se determinó el estado oligomérico de VpGluR y se obtuvo un modelo 3D in silico; sin embargo, bajo el proceso experimental realizado en este estudio la proteína no fue funcional. El sustrato D-Glu se caracterizó estructuralmente mediante cristalografía y difracción de rayos X. D-Glu cristalizó con un átomo de cloro (D-Glu:Cl). Con lo cual se obtuvieron los parámetros de configuración absoluta (Flack, Parsons, Hooft), por lo que se asignó la configuración absoluta del compuesto como D-Glu:Cl(R). Por otra parte, la VpGrx2 se sobreexpresó de manera soluble y se purificó secuencialmente por cromatografía de afinidad y exclusión molecular. Se determinó el estado oligomérico de VpGrx2 como monómero y se determinó su actividad enzimática in vitro. La proteína presentó actividad como proteína Grx (redox) así como una actividad catalítica tipo GST (transferasa). Sin embargo, presentó mayor actividad enzimática de hasta dos órdenes de magnitud superior como transferasa al compararla con la actividad tipo redox. La investigación de dichas enzimas y sustratos permitió una mayor comprensión de los mecanismos de defensa de V. parahaemolyticus, lo que concederá en un futuro a mediano o largo plazo contrarrestar los efectos negativos del mismo en la acuicultura. Palabras clave: cristalografía, difracción de rayos X, configuración absoluta, glutamato y glutarredoxina. | |
| 11-12-2019 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| INGENIERÍA BIOQUÍMICA | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE DOCTORADO EN CIENCIAS (DC) |
Cargar archivos:
| Fichero | Tamaño | Formato | |
|---|---|---|---|
| Leonardo Yame Fox Uribe.pdf | 2.96 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |