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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/755| DESARROLLO Y EVALUACIÓN DE UN MÉTODO POR PCR DIGITAL EN GOTAS PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL TRANSPORTADOR DE FOSFATO 1 EN PLANTAS DE TOMATE (Solanum lycopersicum L.) CON DEFICIENCIA DE FÓSFORO | |
| WENDY LOPEZ ROMERO | |
| JOSEFINA LEON FELIX JOSE BENIGNO VALDEZ TORRES JOSE BASILIO HEREDIA TOMAS OSUNA ENCISO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| COORDINACIÓN DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA DE PRODUCTOS AGRÍCOLAS PARA ZONAS TROPICALES Y SUBTROPICALES | |
| El fósforo (P) es un macronutriente involucrado en procesos biológicos y metabólicos (respiración, división celular, síntesis de adenosín trifosfato, fotosíntesis, transducción de señales celulares, etc.) de las plantas. Su deficiencia, activa cascadas de señalización celular que modifican la expresión génica; así como la producción de enzimas, proteínas y metabolitos que inducen cambios fisiológicos como el retraso de la madurez, defectos en la coloración, crecimiento reducido del tallo, incrementa el desarrollo de raíces terciarias, entre otros. Actualmente, para el diagnóstico de la nutrición de los cultivos se emplean análisis fisicoquímicos; sin embargo, deben ser complementados con el análisis de suelo para obtener un panorama integral de la movilización de los nutrientes del suelo hacia la planta. Previamente se ha correlacionado la expresión del gen transportador de fosfato 1 (LePT1) en tomate, a la deficiencia de P, constituyendo una alternativa para el uso de éste como indicador del estado metabólico de las plantas y marcador molecular de deficiencia de P. Por lo que en el presente estudio, se desarrolló y evaluó una metodología para la cuantificación absoluta de copias de LePT1 mediante PCR digital en gotas, en plantas de tomate con deficiencia inducida de P, como base para generar una metodología molecular de diagnóstico complementaria, que permita adecuar la nutrición al metabolismo celular de la planta. Para ello, primeramente se amplificó por PCR punto final con ADNc de hoja de tomate (var. San Marzano) como molde, un fragmento de aproximadamente 146 pb de LePT1. Con la secuencia del mismo, se diseñaron iniciadores y sonda de hibridación para su cuantificación en PCR digital en gotas. Se optimizaron las condiciones de amplificación en PCR digital en gotas, mediante un diseño central compuesto de tres factores (temperatura de alineamiento, concentración de iniciadores y concentración de sonda de hibridación) y dos variables de respuesta (resolución y variabilidad,). Las condiciones óptimas de amplificación de LePT1 fueron: 59.77 ºC de temperatura de alineamiento, 782.16 nM de iniciadores y 269.53 nM de sonda. | |
| 2016 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Público en general | |
| AGROQUÍMICA | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE MAESTRÍA EN CIENCIAS. |
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