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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/334| CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE LA ARGININA CINASA DEL CAMARÓN BLANCO Litopenaeus vannamei Y SU PARTICIPACIÓN EN LA FOSFORILACIÓN DE NUCLEÓTIDOS | |
| JOSE MAX HERNANDEZ FLORES | |
| KARINA DALILA GARCIA OROZCO ALDO ALEJANDRO ARVIZU FLORES | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Tecnología de alimentos | |
| "La arginina cinasa (AC) es una proteína de 40 kDa que cataliza la transfosforilación reversible dependiente de magnesio entre la arginina (arg)/ fosfoarginina (PArg) y el ATP/ADP, resultando en una regeneración de éste último durante el aumento de la actividad celular. Esta enzima es de gran importancia biológica, ya que la fosfoarginina es la forma de almacenamiento y movilización de energía química en el músculo de los invertebrados marinos como los crustáceos. En experimentos previos se ha visto que la AC del camarón podría tener un papel importante en la fosforilación de los precursores de timina, además de la función anteriormente mencionada. Debido a que no existen estudios que documenten esta bifuncionalidad en dicha enzima, este trabajo propone demostrar la participación de la AC en la fosforilación de los desoxinucleótidos de timina dTMP y dTDP, ya que se presume, puede tener un papel clave en la síntesis del ADN del camarón, así como participar en la síntesis del ADN viral que afecte al mismo. Se purificó AC a partir del músculo de camarón blanco Litopenaeus vannamei, para realizar ensayos de actividad por métodos espectrofotométricos con su sustrato cognado, la arginina, así como con otros sustratos, como dTMP y dTDP. Se logró apreciar la actividad de la enzima con dichos compuestos con excepción del dTMP, por lo que se concluyó que la AC tiene una actividad cinco veces mayor con la arginina, que con el dTDP. Se determinaron las constantes cinéticas y fisicoquímicas por medio de calorimetría de titulación isotérmica (ITC), con cada uno de los sustratos (arginina, dTDP y ATP), encontrándose una mayor afinidad por el ATP, lo que sugiere una unión secuencial de dichos compuestos en el mecanismo de reacción. Posteriormente, se hicieron ensayos de fluorescencia, donde se pudo apreciar un efecto de apagamiento (quenching) al titular la enzima con el sustrato dTDP, mientras que con los otros dos sustratos (arginina y ATP) no hubo cambios apreciables, lo cual sugiere que la enzima tiene un sitio de unión diferente para cada sustrato. Finalmente se monitoreó la formación de los productos de cada reacción, fosfoarginina y dTTP por medio de HPLC y se corroboró cualitativamente la síntesis de estos compuestos. Palabras clave: Arginina cinasa, fosforilación, dTDP" | |
| 2013-01 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Público en general | |
| BIOLOGÍA Y QUÍMICA | |
| Versión publicada | |
| publishedVersion - Versión publicada | |
| Aparece en las colecciones: | TESIS DE MAESTRÍA EN CIENCIAS. |
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