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http://ciad.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1006/148| MECANISMO MOLECULAR DE ACCIÓN DEL SISTEMA DE QUORUM SENSING NprR-NprRB EN LA ESPORULACIÓN DE Bacillus thuringiensis | |
| ROSINA CABRERA RUIZ | |
| MARIA MAYRA DE LA TORRE MARTINEZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Ciencia de los alimentos | |
| Quorum sensing (QS) es un mecanismo de comunicación bacteriano para regular la expresión génica en respuesta a la densidad celular, a través de moléculas de señalización y proteínas receptoras. En este trabajo se estudió el reconocimiento molecular del receptor de QS NprR con su péptido de señalización NprRB y con el regulador de respuesta Spo0F que participa en la regulación del inicio de la esporulación, todos codificados en el genoma de Bacillus thuringiensis (Bt). Primeramente, se produjo la proteína NprR recombinante utilizando Escherichia coli como sistema de expresión heterólogo. Para lograr el plegamiento y funcionalidad de NprR fue necesario co-expresar las chaperonas DnaK-DnaJ-GrpE y GroEL-GroES. Además, se optimizaron las condiciones de proceso para la producción de NprR utilizando un cultivo en lote alimentado, incrementando 98 veces el rendimiento de NprR con respecto al obtenido en matraz agitado. Se estudió la interacción entre NprR y distintos péptidos de señalización (NprRB) putativos y se encontró que SSKPDIVG, SKPDIVG y SSKPDIV se unieron a NprR con constantes de disociación de 7.19 nM, 28.20 nM y 70.92 nM respectivamente, determinadas por calorimetría de titulación isotérmica; además por espectroscopía de fluorescencia se demostró que la unión del péptido indujo cambios conformacionales en NprR y se observó cooperatividad positiva para la unión del péptido a la proteína. Nuestros resultados indican que el mecanismo de reconocimiento NprR-NprRB se da a través de un proceso de selección conformacional. Un hallazgo importante del presente trabajo fue que en función de las concentraciones de péptido presentes, diferentes holo-formas del complejo proteína-péptido pueden co-existir. Esto sugiere que la concentración de NprRB es un factor importante para las funciones de NprR. Palabras clave: receptor bifuncional NprR, péptido de señalización NprRB, quorum-sensing, reconocimiento molecular, regulador de respuesta Spo0F, phosphorelay. | |
| Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A,C. | |
| 31-01-2015 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
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| Aparece en las colecciones: | TESIS DE DOCTORADO EN CIENCIAS (DC) |
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